Pruebas virucidas de los desinfectantes en salas blancas
En tiempos «normales», a excepción de los fabricantes de vacunas, el control de los virus en las salas blancas no suele ser la máxima prioridad dentro del control de la contaminación. Los virus necesitan un huésped para sobrevivir, ya que son parásitos obligados, sólo ácido nucleico rodeado de una proteína que sólo puede replicarse dentro de una célula huésped, por lo que su capacidad para sobrevivir en superficies duras y secas es mínima.
Los virus son muy pequeños, mucho más pequeños que las bacterias. Por término medio, el tamaño de las bacterias oscila entre 0,5 y 5 µm, pensemos en un ratón frente a un elefante. Los virus no contienen los componentes de un organismo normal como las plantas, los animales o las bacterias, por lo que no pueden reproducirse sin un huésped. Para reproducirse, utilizan sus genes (codificados en el ADN o el ARN) para engañar a la célula huésped para que utilice su propia maquinaria para hacer más copias del virus. Para que los virus engañen al huésped, deben entrar en las células huésped adecuadas. Los virus tienen dos componentes que todos comparten, pero cuya estructura varía, su ácido nucleico y su cápside, cuya combinación se denomina nucleocápside. Algunos virus tienen estructuras adicionales, como una envoltura o un tegumento.
La clasificación de los virus se basa en la recopilación y comparación de estos diversos caracteres que describen al virus. Éstos pueden utilizarse para distinguir un virus de otro. Los caracteres pueden consistir en cualquier propiedad o característica del virus, su genoma (ADN o ARN), su simetría (helicoidal, icosaédrica o compleja), si tiene una envoltura lipídica (con o sin envoltura), el diámetro de la cápside, etc.
Los virus con envoltura son los menos resistentes a la inactivación por desinfección
Virus con envoltura
Los virus con envoltura tienen una capa adicional que cubre la cápside. Esta membrana está compuesta por lípidos y proteínas que «robó» de las células huésped y por glicoproteínas virales. Las protuberancias, pomos y picos que se utilizan en las imágenes de los virus con envoltura, como el SARS-CoV-2, representan estructuras de la envoltura viral.
Los virus con envoltura son los menos resistentes a la inactivación por desinfección, esto se debe a que la envoltura lipídica se ve fácilmente comprometida por la mayoría de los desinfectantes y detergentes. Una vez dañada la envoltura lipídica, la integridad del virus se ve comprometida, neutralizando así su infectividad. Las familias virales de este subgrupo son las siguientes Arenaviridae, Coronaviridae (es decir, SARS-CoV-2), Filoviridae, Flaviviridae, Herpesviridae, Paramyxoviridae, Poxviridae y Retroviridae.
Virus sin envoltura
En cuanto a la resistencia a los desinfectantes, ayuda a separar estos virus por su tamaño, los pequeños virus sin envoltura de menos de 50 nm pueden ser muy resistentes a la inactivación por desinfección, ya que a pesar de la falta de una envoltura lipídica, estos organismos tienen una cápside proteica muy resistente. Las familias de este subgrupo incluyen: Picornaviridae, Parvoviridae, Caliciviridae, Astroviridae y Polyomaviridae.
Pruebas de eficacia de los desinfectantes contra los virus
La norma BS EN 14885:2018 Desinfectantes y antisépticos químicos – Aplicación de las normas europeas para desinfectantes y antisépticos químicos enumera tres normas EN para la prueba de la eficacia virucida de los desinfectantes químicos; EN14476, EN14675 y EN13610, que son todas pruebas de suspensión.
Las pruebas de eficacia EN que normalmente utilizan los fabricantes para hacer afirmaciones sobre los desinfectantes para salas blancas son las pruebas para la evaluación en los ámbitos alimentario, industrial, doméstico e institucional. Sin embargo, no hay ninguna prueba virucida específica para este ámbito, probablemente porque los virus no sobreviven mucho tiempo fuera del organismo anfitrión. No obstante, la norma EN 14885 establece que si no existe una norma para un área determinada, se puede utilizar una norma de otra área, por lo que se recomienda el uso de la norma EN14476 para la evaluación en el área médica en la industria farmacéutica.
El Reglamento de Productos Biocidas que autoriza la venta de productos desinfectantes en la Unión Europea también establece que un desinfectante de superficies duras para uso industrial (no sanitario) debe cumplir los requisitos de la prueba EN14776 y una prueba de fase 2, paso 2, del área médica, utilizando adenovirus y norovirus murino para ser clasificado como virucida.
Una prueba de superficie reciente que no está incluida en la norma BS EN 14885, ni ha sido señalada por el BPR, la norma BS EN 16777:2018, es una prueba cuantitativa de superficie no porosa sin acción mecánica para la evaluación de la actividad virucida de los desinfectantes químicos utilizados en el área médica.
El ensayo de virus es único dentro del laboratorio porque la presencia de virus antes y después del tratamiento del producto no se determina observando el crecimiento del virus, sino observando el daño causado por la infección a las células del huésped mamífero. Tras un estudio, se analizan microscópicamente conjuntos individuales de células para identificar dónde se dañan las capas celulares sanas. Este daño se conoce como efectos citopáticos (ECP) de la infección. La cantidad y calidad de los ECP se utiliza para calcular la cantidad de virus presente.
Existen dos métodos de ASTM International para probar los desinfectantes de superficies duras contra los virus. El ASTM- E1052 es un método de prueba destinado a demostrar la actividad virucida en suspensión y el ASTM-E1053 es la evaluación de la actividad virucida de productos químicos en superficies ambientales inanimadas y no porosas. Se sugiere una amplia gama de virus para las pruebas, pero para demostrar que la sustancia de ensayo tiene una amplia actividad virucida, debe demostrarse que es eficaz contra al menos un virus no envuelto.
Para que un fabricante de desinfectantes declare su actividad virucida en la UE, la Agencia Europea de Sustancias y Preparados Químicos recomienda encarecidamente el uso de ensayos EN. Si no existe un ensayo adecuado, debe modificarse un ensayo EN existente si es posible. Sólo si eso no es posible, el fabricante puede utilizar los métodos ASTM. Dado que existe una prueba europea para los virus en una superficie, no se verán muchos (probablemente ninguno) desinfectantes de la UE probados según los métodos ASTM, a menos que se hayan realizado antes de que la norma EN 16777 estuviera disponible. La tabla 1 muestra un resumen de las pruebas de eficacia vírica disponibles.
La norma BS EN 14476 se publicó por primera vez en 2005, necesitando una reducción log4 contra dos virus sin envoltura para demostrar su actividad virucida. Un virus de ARN del grupo Picornavirus (Poliovirus) y un virus de ADN del grupo Adenovirus (Adenovirus 5). El poliovirus se selecciona como virus de prueba porque tiene una gran resistencia a los productos químicos, es estable a los ácidos y no le afectan los disolventes lipídicos, como el éter, ni la mayoría de los detergentes o productos cuaternarios. En 2013, el norovirus murino (MNV) se incluyó como virus de prueba como sustituto del norovirus humano. Las adiciones posteriores de 2015 y 2019 añadieron el virus Vaccinia como virus envuelto para las pruebas de lavado de manos y desinfectantes de superficies. Sin embargo, los resultados de la versión anterior de la prueba siguen siendo válidos.
Se pueden realizar diferentes niveles de afirmación virucida utilizando la prueba de suspensión actual, BS EN 14476:2013+A2:2019 9. Para una actividad virucida completa se necesita una reducción log4 contra el virus de la polio, el adenovirus y el norovirus murino. Esto también cubriría una reclamación contra todos los virus con envoltura, como el SARS-CoV-2. Para la actividad virucida de espectro limitado: se necesita una reducción log4 contra el Adenovirus y el Norovirus murino. Esto cubriría una reclamación contra todos los virus con envoltura y Norovirus, Rotavirus y Adenovirus. Si sólo se necesita una reclamación contra los virus con envoltura, se necesita una reducción log4 contra el virus Vaccinia.
Más recientemente se ha lanzado una prueba de superficie BS EN 16777:2018 10, que estipula como organismos estándar, dos virus sin envoltura, Adenovirus y Norovirus murino, Poliovirus no se utiliza debido a los problemas de secado y un virus con envoltura, Vaccinia virus. Una suspensión de prueba se inocula en una superficie de prueba y se seca, la solución bajo prueba se aplica entonces para cubrir la película de virus seca. Se necesita una reducción log4 para pasar y no hay reducción de criterios frente a la prueba de suspensión, a diferencia de otros métodos de prueba de desinfección EN. Para obtener una actividad virucida completa, se necesita una reducción log4 contra el adenovirus y el norovirus murino, pero el producto también debe haber superado la prueba EN14476 para el virus de la polio. Esto también daría una declaración contra todos los virus con envoltura. Los demás criterios de aprobación son los mismos que la norma EN 14476:2013+A2:2019.
Dado que la resistencia a los desinfectantes es tan diferente entre los virus con envoltura y los virus sin envoltura, siempre tenemos que considerarlos por separado
Desinfectantes virucidas
La mayoría de los desinfectantes no son eficaces contra todos los microorganismos. Los desinfectantes para salas blancas se dividen en dos grupos principales: desinfectantes de amplio espectro y desinfectantes esporicidas.
Como los virus no suelen ser un organismo clave para las pruebas de las salas limpias, los desinfectantes para salas limpias no siempre tendrán virus como parte de su cartera de pruebas estándar. Recientemente se han realizado más pruebas para demostrar que un determinado desinfectante es eficaz contra el actual Coronavirus. Compruebe siempre si un fabricante dispone de datos de pruebas de virus, ya que puede haberlas realizado para un cliente específico pero no publicarlas de forma rutinaria.
Dado que la resistencia a los desinfectantes es tan diferente entre los virus con envoltura y los virus sin envoltura, siempre hay que considerarlos por separado, tal y como refuerzan las pruebas de eficacia. Como los virus con envoltura son fáciles de matar, la mayoría de los biocidas de amplio espectro los matan. Como los virus pequeños sin envoltura son tan difíciles de matar, probablemente se necesite un esporicida para estos organismos.
Las soluciones de alcohol al 60-80% son eficaces contra los virus con envoltura, incluido el SARS-CoV-2. La mayoría de los desinfectantes basados en compuestos de amonio cuaternario, tensioactivos anfóteros y biguanidas serán eficaces contra los virus con envoltura, pero los tiempos de contacto variarán. Es poco probable que tengan algún efecto sobre los virus sin envoltura. Para matar los virus sin envoltura se necesitaría un esporicida como el ácido hipocloroso (>1000ppm), hipocloritos (>5000ppm), ácido peracético, mezclas de peróxido de hidrógeno/ácido peracético, de nuevo los tiempos de contacto variarán.
Así pues, aunque no existen pruebas específicas de eficacia virucida para la evaluación de desinfectantes en los ámbitos alimentario, industrial, doméstico e institucional, como suelen utilizar los fabricantes de desinfectantes para salas blancas, existen pruebas EN de eficacia virucida que pueden utilizar los fabricantes, y de hecho lo hacen. Si una empresa busca un desinfectante validado para el SARS-CoV-2, cualquier desinfectante que supere las pruebas EN para virus no envueltos o virus envueltos será aceptable.
En Isobox Systems, siempre abogamos por un correcto mantenimiento de salas limpias, usando desinfectantes y atendiendo a las recomendaciones que trasladamos desde las diferentes normativas.